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流式细胞仪厂家教你如何调试和使用该产品
浏览: 发布日期:2018-08-11
  流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。流式细胞仪厂家教你如何调试和使用该产品。
 
流式细胞仪厂家

  一、调试和校准
  流式细胞仪在使用前,甚至在使用过程中都要精心进行调试,以保证工作的可靠性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。
  激光强度:除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外,还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出。
  液流速度:可通过操作台数字显示监督,调节 气体压力大小以获得稳定的液流速度。
  测量区光路调节 :这是调试工作的关键。需要保证在测量区的液流、激光束、90散射测量光电系统垂直正交,而且交点较小。一般可在用标准荧光微球等校准中完成。
  流式细胞术中所测得的量是相对值,因此需要在使用前或使用中对系统进行校准或标定,这样才能通过相对测量获得意义。因而FCM中的校准具有双重功能:仪器的准直调整和定量标度。标准样品应该稳定,有形成份形状应是大小比较一致球形,样品分散性能良好,且经济、容易获得。常用标准荧光微球作为非生物学标准样品,鸡血红细胞做为生物学标准样品。微球用树脂材料制作,或标有荧光素,或不标记荧光素。所用的鸡血红细胞标准样品制作过程昭下:取3.8%枸橼酸或肝素抗凝的鸡血(抗凝剂:鸡血=1:4),经PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛与清洗后的鸡红细胞混合,室温下振荡醛化24h,后经PBS再清洗,贮4℃冰箱中备用。需要指出的是因为未经荧光染色,所测光信号为鸡血红蛋白的自发荧光。
 
流式细胞仪厂家
  二、流式细胞仪仪器的操作和使用
  ①打开电源,对系统进行预热;
  ②打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;
  ③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;
  ④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的荧光强度强,并要求变异系数为小;
  ⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程;
  ⑥样品测量完毕后,再用去离子水冲洗液流系统;
  ⑦因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统,存贮量更大),因此可关闭气体、测量装置,而单独使用计算机进行数据处理;
  ⑧将所需结果打印出来。
 
流式细胞仪厂家

  三、流式细胞仪厂家总结操作和使用中的注意事项
  1)光电倍增管要求稳定的工作条件,暴露的较强的光线下以后,需要较长时间的“暗适应”以消除或降低部分暗电流本底才能工作;另外还要注意磁屏蔽;
  2)光源不得在短时间内(一般要1h左右)关上又打开;使用光源必须预热并注意冷却系统工作是否正常;
  3)液流系统必需随时保持液流畅通,避免气泡栓塞,所使用的鞘流液使用前要经过过滤、消毒;
  4)注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等;
  5)特别强调每次测量都需要对照组。
 

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